Mengun frumuræktar getur auðveldlega orðið algengasta vandamálið á frumuræktarrannsóknarstofum og hefur stundum mjög alvarlegar afleiðingar í för með sér.Hægt er að skipta frumuræktunarmengun í tvo flokka, efnamengun eins og miðlungs-, sermi- og vatnsóhreinindi, endotoxín, mýkiefni og hreinsiefni og líffræðileg aðskotaefni eins og bakteríur, mygla, ger, vírusa, krosssýkingu í mycoplasma.Mengað af öðrum frumulínum.Þó að það sé ómögulegt að útrýma mengun að fullu, er hægt að draga úr tíðni hennar og alvarleika með því að átta sig vel á uppruna hennar og fylgja góðri smitgát.
1.Þessi hluti útlistar helstu tegundir líffræðilegrar mengunar:
Bakteríumengun
Mygla og vírusmengun
Mycoplasma mengun
Germengun
1.1Bakteríumengun
Bakteríur eru stór hópur alls staðar nálægra einfrumu örvera.Þeir eru venjulega aðeins nokkrar míkron í þvermál og geta verið í ýmsum gerðum, allt frá kúlum til stanga og spírala.Vegna alls staðar, stærðar og örs vaxtarhraða, eru bakteríur, ásamt ger og myglusveppur, algengustu líffræðilegu mengunarefnin í frumuræktun.
1.1.1 Greining á bakteríumengun
Auðvelt er að greina bakteríumengun með sjónrænni skoðun á ræktuninni innan nokkurra daga frá því að hún sýktist;
Sýktar ræktanir virðast venjulega skýjaðar (þ.e. gruggugar), stundum með þunnri filmu á yfirborðinu.
Skyndileg lækkun á sýrustigi ræktunarmiðilsins kemur einnig oft fyrir.
Undir lítilli aflsmásjá birtast bakteríurnar sem örsmáar, hreyfanlegar korn á milli frumanna og athugun undir aflmikilli smásjá getur leyst lögun einstakra baktería.
1.2 Mygla og vírusmengun
1.2.1 Myglamengun
Mygla eru heilkjörnungar örverur í svepparíkinu sem vaxa í formi fjölfruma þráða sem kallast þráður.Tengikerfi þessara fjölfruma þráða innihalda erfðafræðilega eins kjarna sem kallast nýlendur eða mycelium.
Svipað og germengun helst pH ræktunarinnar stöðugt á upphafsstigi mengunarinnar og eykst síðan hratt eftir því sem ræktunin sýkist alvarlegri og verður skýjuð.Í smásjánni er mycelium venjulega þráðlaga, stundum sem þéttir gróþyrpingar.Gró margra myglusveppa geta lifað af í gríðarlega erfiðu og óvinsælu umhverfi á meðan á dvalastigi þeirra stendur og virkjast aðeins þegar rétt vaxtarskilyrði eru fyrir hendi.
1.2.2 Veirusmengun
Veirur eru smásæir smitefni sem taka yfir vélar hýsilfrumunnar til æxlunar.Mjög lítil stærð þeirra gerir það að verkum að erfitt er að greina þá í ræktun og fjarlægja úr hvarfefnum sem notuð eru á frumuræktunarrannsóknarstofum.Þar sem flestar vírusar gera mjög strangar kröfur til hýsils síns hafa þær yfirleitt ekki skaðleg áhrif á frumuræktun annarra tegunda en hýsilsins.
Hins vegar getur notkun vírussýktra frumurækta skapað alvarlega hættu fyrir heilsu starfsfólks á rannsóknarstofum, sérstaklega ef frumur úr mönnum eða prímata eru ræktaðar á rannsóknarstofunni.
Hægt er að greina veirusýkingu í frumuræktun með rafeindasmásjá, ónæmislitun með setti af mótefnum, ELISA eða PCR með viðeigandi veiruprimerum.
1.3Mycoplasma mengun
Mycoplasmas eru einfaldar bakteríur án frumuveggja og talið er að þær séu minnstu lífverurnar sem endurtaka sig sjálfar.Vegna einstaklega lítillar stærðar þeirra (venjulega minna en 1 míkron) er erfitt að greina mycoplasma þar til það nær mjög miklum þéttleika og veldur því að frumuræktun hrörni;Þangað til eru yfirleitt engin augljós merki um sýkingu.
1.3.1 Greining á mycoplasma-mengun
Sum hægvaxandi mycoplasmas geta varað í ræktun án þess að valda frumudauða, en þau breyta hegðun og efnaskiptum hýsilfrumna í ræktun.
Langvinn mycoplasma sýking getur einkennst af minni frumufjölgunarhraða, minni mettunarþéttleika og kekkjun í sviflausnarræktun.
Hins vegar er eina áreiðanlega leiðin til að greina mycoplasma mengun að prófa ræktunina reglulega með því að nota flúrljómandi litun (td Hoechst 33258), ELISA, PCR, ónæmislitun, sjálfsmyndatöku eða örverupróf.
1.4 Germengun
Ger eru einfruma heilkjörnungar af svepparíkinu, á bilinu frá nokkrum míkronum (venjulega) upp í 40 míkron (sjaldan).
1.4.1 Greining á germengun
Eins og með bakteríumengun geta ræktanir sem eru mengaðar af geri orðið skýjaðar, sérstaklega ef mengunin er á langt stigi.Sýrustig ræktunar sem mengað er af ger breytist mjög lítið þar til mengunin verður alvarlegri, en þá hækkar pH venjulega.Í smásjánni birtist ger sem einstakar egglaga eða kúlulaga agnir og geta framleitt smærri agnir.
2.Krosssýking
Þótt það sé ekki eins algengt og örverumengun er víðtæk víxlamengun margra frumulína með HeLa og öðrum hraðvaxandi frumulínum skýrt skilgreint vandamál með alvarlegar afleiðingar.Fáðu frumulínur frá virtum frumubönkum, athugaðu reglulega eiginleika frumulínanna og notaðu góða smitgát.Þessar aðferðir munu hjálpa þér að forðast krossmengun.DNA fingrafar, karyotyping og samsætugerð geta staðfest hvort um krossmengun sé að ræða í frumuræktinni þinni.
Þótt það sé ekki eins algengt og örverumengun er víðtæk víxlamengun margra frumulína með HeLa og öðrum hraðvaxandi frumulínum skýrt skilgreint vandamál með alvarlegar afleiðingar.Fáðu frumulínur frá virtum frumubönkum, athugaðu reglulega eiginleika frumulínanna og notaðu góða smitgát.Þessar aðferðir munu hjálpa þér að forðast krossmengun.DNA fingrafar, karyotyping og samsætugerð geta staðfest hvort um krossmengun sé að ræða í frumuræktinni þinni.
Pósttími: Feb-01-2023